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多肽合成-多肽定制

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多肽問答

TAT peptide 序列為Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (RKKRRORRR)可以攜帶多肽穿膜。

環(huán)肽包括Cys-Cys之間形成的硫硫鍵(S-S),即氧化肽,可以提供一對(duì)S-S,二對(duì)S-S,三對(duì)S-S的多肽合成,也可以提供多肽分子間的氧化,包括同一條多肽間形成二聚體,二條不同多肽間的氧化等。另外也提供酰胺成環(huán),包括頭尾環(huán)肽,側(cè)連環(huán)肽等。也可以提供一些酯鍵,硫酯鍵等環(huán)肽的合成。

點(diǎn)擊化學(xué)的代表反應(yīng)為銅催化的疊氮-炔基Husigen環(huán)加成反應(yīng)(Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition)。點(diǎn)擊化學(xué)的概念對(duì)化學(xué)合成領(lǐng)域有很大的貢獻(xiàn),在藥物開發(fā)和生物醫(yī)用材料等的諸多領(lǐng)域中,它已經(jīng)成為目前最為有用和吸引人的合成理念之一。具體在多肽中應(yīng)用主要是在多肽中帶有疊氮基或炔基官能團(tuán),常用的化合物有以下幾種可以選擇。 Fmoc - 4 – azidophenylalanine Fmoc - Phe(N3) - OH; Fmoc – Azidohomoalanine Fmoc - D – propargylglycine Fmoc - D - Pra - OH Fmoc - L - propargylglycine Fmoc - L - Pra - OH Fmoc - Lys(N3) – OH Fmoc - azidolysine; Fmoc - lys(azide); Azidoacetic acid 6-Azidohexanoic acid Propiolic acid

主要有Lys(Me), Lys(Me2), Lys(Me3) 以及Orn(Me), Orn(Me2), Orn(Me3),Arg(Me), Arg(Me2,Symetrical) , Arg(Me2,ASymetrical)

多肽C端硫酯修飾后可以應(yīng)用于Native chemical ligation反應(yīng),與另外一條N端為半胱氨酸的多肽在中性條件下發(fā)生化學(xué)選擇之硫酯轉(zhuǎn)移反應(yīng)(chemoselective transthioesterification),重排成酰胺鍵,實(shí)現(xiàn)二條多肽間的連接??梢詰?yīng)用于長(zhǎng)肽通過片段進(jìn)行連接。

經(jīng)常有一些多肽需要與一些藥物或者特定功能的化合物進(jìn)行連接,或者要把多肽連接到某些載體上去,需要化學(xué)鍵進(jìn)行結(jié)合,一般多肽具有氨基或羧酸官能團(tuán)可以考慮下相應(yīng)的羧酸或氨基進(jìn)行縮合,另外一種選擇是通過巰基(thiol)與馬來酰亞胺(Maleimide)在PH 8的環(huán)境下連接。多肽中可以同過帶有Cys或者M(jìn)aleimide官能團(tuán)進(jìn)行修飾。Maleimide修飾通??梢赃x擇化合物3-Maleimidopropionic Acid (CAS 7423-55-4)實(shí)現(xiàn)。

一條多肽產(chǎn)品中除了多肽本身還包括生產(chǎn)過程中帶入的水份及有機(jī)鹽分等雜質(zhì),多肽純度僅指多肽本身所含肽產(chǎn)品的含量及雜質(zhì)的含量,不包括水份等雜質(zhì);而多肽含量則是指目標(biāo)多肽在產(chǎn)品中的凈含量,一般以N元素分析或氨基酸分子的方法來檢測(cè);因此一條多肽即使純度達(dá)到99%,因?yàn)楫a(chǎn)品中還包含水份及有機(jī)鹽分等,它的含量可能也只有70-80%。

多數(shù)多肽都可以用超純水溶解,對(duì)于一些難溶的多肽,先要分析其氨基酸序列,對(duì)于酸性多肽,可先以小量堿性(如0.1%氨水)溶液溶解,然后稀釋至所需濃度,對(duì)于堿性多肽,可先以小量酸性(如醋酸,三氟乙酸)溶液溶解,然后稀釋至所需濃度,對(duì)于疏水性多肽,可用強(qiáng)極性有機(jī)溶劑溶解,如DMF,甲醇,丙醇,異丙醇,DMSO等。

抗原多肽選擇的基本原則有(1)盡可能是在蛋白表面;(2)保證該段序列不形成α-helix; (3)N,C端的肽段比中間的肽段更好;(4)避免蛋白內(nèi)部重復(fù)或接近重復(fù)段的序列;(5)避免同源性太強(qiáng)的肽段;(6)交聯(lián)可以交聯(lián)在N、C兩端,選擇依據(jù)就是交聯(lián)在對(duì)產(chǎn)生抗體不太重要的一端;(7)序列中不能有太多的Pro,但有一兩個(gè)Pro有好處,可以使肽鏈結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定一些,對(duì)產(chǎn)生特異性抗體有益。

為了使生產(chǎn)抗體獲得最佳效果,仔細(xì)地設(shè)計(jì)抗原多肽是很有必要的,設(shè)計(jì)應(yīng)滿足一個(gè)基本條件:在免疫過程中,該抗原既不會(huì)產(chǎn)生過強(qiáng)的免疫反應(yīng),同時(shí)又能產(chǎn)生出對(duì)感興趣的蛋白有結(jié)合能力的抗體。